Oksaalhappe sisalduse määramine puu- ja köögiviljades kõrgefektiivse vedelikkromatograafia (HPLC) abil
1. Eksperimentaalne põhimõte ja meetodi ülesehitus
Kuna oksaalhape on puu- ja köögiviljades levinud orgaaniline hape, mõjutab selle sisaldus otseselt toidu maitset ja toiteväärtust. Selles katses kasutatakse pöördfaasilist kõrgefektiivset vedelikkromatograafiat (RP-HPLC). Happelises liikuva faasi tingimustes eraldatakse oksaalhape häirivatest ainetest algtasemeni, kasutades C18 kromatograafilist kolonni. Kvantitatiivseks analüüsiks kasutatakse 210 nm lainepikkusele seatud ultraviolettdetektorit, mis põhineb oksaalhappe molekulide karboksüülrühmade UV-neeldumisomadustel.
2. Standardkõver ja proovi ettevalmistamine
Standardlahuste valmistamiseks kasutatakse gradientlahjendusmeetodit: kaalutakse täpselt 25,0 mg oblikhappe dihüdraati ja lahjendatakse see ülipuhta veega 25 ml-ni, et saada 1 mg/ml põhilahus. See lahjendatakse järjestikku standardlahusteks kontsentratsioonidega 50, 100, 200, 400 ja 800 µg/ml, kusjuures iga kontsentratsioon süstitakse kolmes korduses.
Proovi ettevalmistamiseks kasutatakse mikrolaineahjuga ekstraheerimist: kaaluge 5,00 g puu-/köögivilja homogenaati, lisage 10 ml 0,1 mol/l vesinikkloriidhappe lahust, töödelge mikrolaineahjus 60 °C juures 10 minutit, filtreerige läbi 0,45 µm membraanfiltri ja koguge filtraat testimiseks.
3. Kromatograafiliste tingimuste optimeerimine
Liikuv faas on 0,01 mol/l kaaliumdivesinikfosfaatpuhvri (pH 2,5) ja atsetonitriili (95:5) süsteem voolukiirusega 0,8 ml/min ja kolonni temperatuuriga 35 °C. Atsetonitriili osakaalu reguleerimine näitab, et kui orgaanilise faasi sisaldus ületab 10%, lüheneb oksaalhappe retentsiooniaeg alla 3 minuti, kuid toimub maksimaalne saba eraldumine. Lõplikes optimeeritud tingimustes on oksaalhappe retentsiooniaeg 4,2 minutit, saavutades täieliku eraldumise külgnevatest sidrunhappest ja õunhappest (resolutsioon > 1,5).
4. Meetodi valideerimine
Lineaarse vahemiku kontrollimine näitab head lineaarset seost piigi pindala ja kontsentratsiooni vahel vahemikus 10–1000 µg/ml (R² = 0,9993). Signaali-müra suhte meetodil määratud avastamispiir (LOD) on 0,5 µg/ml. Korduvuskatsetes on sama spinatiproovi kuue kordusmääramise RSD 1,8%. Kolme tasemega (80%, 100% ja 120%) piikide saagise katsed annavad keskmiseks saagiseks vastavalt 98,2%, 102,4% ja 97,8%, mis vastab kvantitatiivse analüüsi nõuetele.
5. Reaalsete proovide analüüs
Testiti kuut kaubanduslikult saadaval olevat puu- ja köögivilja: spinat (356 ± 12 mg/100 g), seller (215 ± 9 mg/100 g), tomat (18 ± 2 mg/100 g), õun (6 ± 1 mg/100 g), banaan (ei tuvastatud) ja brokkoli (89 ± 5 mg/100 g). Võrdlus riikliku standardmeetodiga (GB 5009.277-2016) näitab, et kahe meetodi suhteline hälve on alla 5%, mis kinnitab selle meetodi usaldusväärsust. Eelkõige on HPLC meetodil madala sisaldusega proovide analüüsimisel suurem tundlikkus kui traditsioonilistel tiitrimismeetoditel.
6. Põhimärkused
Proovi eeltöötluse ajal tuleb pH väärtust rangelt kontrollida. Kui ekstrakti pH ületab 3, põhjustab kaltsiumoksalaadi sadestumine madalaid testitulemusi. Liikuv faas tuleks iga päev värskelt valmistada, et vältida soolade sadestumist ja kolonni ummistumist. Pärast iga 20 süstimist loputage kolonni atsetonitriili ja vee seguga (30:70) 30 minutit, et vältida kolonni efektiivsuse halvenemist. Pigmenti sisaldavate proovide (nt lilla kapsas) puhul on soovitatav enne süstimist lisada tahkefaasi ekstraktsiooni puhastusetapp.
7. Rakendus- ja laiendamisjuhised
Seda meetodit saab laiendada oksaalhappe tuvastamisele bioloogilistes proovides, näiteks uriinis ja veres. Liikuva faasi koostise reguleerimise abil (nt tetrabutüülammooniumhüdroksiidi lisamisega) saab samaaegselt määrata nii oksaalhapet kui ka selle metaboliite. Massispektromeetria detektoriga kombineerituna saab luua täpsema jälgede tuvastamise meetodi. Toiduainetööstuses saab see meetod pakkuda olulist andmetuge madala oksaalhappesisaldusega sortide valimiseks ja toiduvalmistamise protsesside optimeerimiseks.
Zibo Anhao Chemical Co., Ltd. – oblikhape
Zibo Anhao Chemical Co., Ltd. on usaldusväärne tarnija ja eksportija kvaliteetsele oksaalhappele (tööstuslik puhtusaste, vähemalt 99,6%) Shandongi provintsist Hiinast. Meie oksaalhape on valge kristalliline tahke aine, tuntud ka kui etaandihape, molekulaarvalemiga C₂H₂O₄. Sellel on kõrge puhtusaste, madal lisandite sisaldus ja stabiilne kvaliteet partiide lõikes, mis vastab tekstiili-, naha-, metallurgia-, haruldaste muldmetallide töötlemise, keemilise puhastuse ja ehitustööstuse nõudmistele.
Pakume nii veevaba kui ka dihüdreeritud oblikhapet, mis on saadaval 25 kg, 50 kg ja 1000 kg kottides. Rangete kvaliteedikontrolli protseduuride, täielike testiaruannete ja paindlike tarneplaanide abil tagame stabiilse tarne ja järjepideva jõudluse ostjatele kogu maailmas. Meie tooteid on laialdaselt eksporditud Kagu-Aasiasse, Euroopasse, Aafrikasse ja Ameerikasse, kus oleme pälvinud tunnustust usaldusväärse kvaliteedi ja konkurentsivõimeliste hindade eest.
Valige Zibo Anhao Chemical usaldusväärse oblikhappe tarnimise ja professionaalse universaalse keemiateenuse saamiseks.
Valige Zibo Anhao Chemical, kui soovite kõrge puhtusastmega oblikhapet, mis pakub teie ettevõttele stabiilset jõudlust ja väärtust. Hulgitellimuste või tehniliste kirjelduste saamiseks võtke meiega ühendust: info@anhaochemical.com
